Billige DIY GFP (Green Fluorescent Protein) Illuminator - 💡 Fix My Ideas

Billige DIY GFP (Green Fluorescent Protein) Illuminator

Billige DIY GFP (Green Fluorescent Protein) Illuminator


Forfatter: Ethan Holmes, 2019

Det var ikke noe skumle-crawly fetish som fikk meg til å lese The Worm Breeder's Gazette.I stedet snakket det med Kathryn Hedges - en smart, lidenskapelig og velbevisst vitenskapsmann og kunstner - om The Gazette er tips om å lage en GFP-belysning på den billige. GFP, eller grønt fluorescerende protein, er en fluorescerende markør som ofte brukes i molekylærbiologi og nevrovitenskap.

Under hennes mastergrad ved Humbolt State University ble Kathryn, som mange andre vitenskapelige forskere, utfordret med budsjettkutt og vanskeligheten med å finne tilskuddsstøtte. For å kunne fortsette sitt arbeid med nematode nevroner i en kontanterstrammet avdeling da hun hadde et 11-timers behov for nytt utstyr, løsnet Kathryn kraften til henne "la oss se hvordan kan vi gjøre denne bedre og billigere" mentaliteten for å hacke DIY GFP illuminator i et bedre, forskningsverdig system, i stand til å visualisere nevroner i små ormer kun 1 millimeter lang.

Hvorfor var dette viktig å Kathryn? I hennes ord, "holdt en av mine stammer til å velge mot GFP hvis jeg ikke gjorde håndvalgte de lyseste ormene hver generasjon. Uten en måte å se GFP på "dissekter" -mikroskopet der jeg plukket opp enkelte ormer med en liten spatel, kunne jeg ikke garantere at alle deres avkom ville være fluorescerende, noe som er et problem når jeg prøver å se om en behandling skader dem for å få dem til å miste fluorescens. "

Resultatet: "De eneste mikroskoper vi hadde med GFP-evner var uegnet til å forstørre ormer mens de flyttet, og å kjøpe et passende" omfang ville ha kostet tusenvis av dollar. Jeg hadde $ 750 igjen i budsjettet, så jeg brukte ca $ 80 på LED-deler og bygget en belysning. Det var ikke lyst nok til å se lange tynne celler, så jeg brukte $ 825 på toppkvalitetsfiltre, reddet et gammelt mikroskop okular som fokuseringslins, og brukte rørleggerbeslag for å montere det på en mikromanipulator vi hadde i laboratoriet. Da kunne jeg velge min skinneste ormer, øke pålitelig skinnende ormlarver, og fullføre mine eksperimenter. Hvis jeg hadde sporet en større funksjon i GFP, eller jeg hadde brukt rødt fluorescerende protein, kunne jeg sannsynligvis ha brukt billige filtre og gjort det hele under $ 100. Hvis jeg skulle fortsette mine eksperimenter, kunne jeg bruke denne illuminator når du krysset GFP-stammer for å se hvilken avkom har begge GFP-markørene. "

Kathryns oppgaverådgiver oppmuntret denne typen eksperimentering, da han og hans egen avhandlingskonsulent hadde utviklet sitt eget DIY-utstyr for å oppdage nervegjennomføringshastigheten i en liten ferskvannsanneleger. Prototypen hender fortsatt på et oppslagstavle over skrivebordet. Han lærer ikke bare dyrfysiologistudenter hvordan han kan gjøre neurofysiologi noninvasively, han og hans forskerstudenter har publisert papirer ved hjelp av denne metoden for å samle inn data. Han er fan av Backyard Brains Spiker Box og håper å se den i aksjon.

Ved å hacket sitt eget verktøy, uten å ha gjennomgått den for høye prisen for å kjøpe en gjennomsnittlig belysning for tusenvis av dollar (selv brukt), var Kathryn i stand til å fullføre oppgaven sin. Belysningsapparatet er nyttig for alle DIY-forskere som trenger å se uttrykket for GFP- eller RFP (Røde Fluorescerende Protein) -gener i bakterier eller c. elegans. Og Kathryn er bevis på at du kan gjøre det på en krone.

Detaljer om grunnleggende GFP Illuminator fra The Worm Breeder's Gazette er under (etter hoppet). For å lære mer om Kathryns forbedringer, og å se notater på ormer, sjekk ut innlegget hennes på Fantastiske farger.

[Kreditt til Ian Chin-Sang og Weiwei Zhong]

Bruke LED som en billig kilde for å oppdage GFP og DsRED

Ian Chin-Sang1 og Weiwei Zhong Institutt for biologi, Queen's University, Kingston, ON, Canada, 2Department of Biochemistry and Cell Biology, Rice University, Houston TX Korrespondanse til: Weiwei Zhong ([email protected])

Fluorescensdeteksjonskomponenter er for kostbare å bli installert i hvert stereoskop. Ofte er våre fluorescerende markører veldig lyse og krever ikke hele kapasiteten til slikt utstyr. Her presenterer vi et LED-oppsett som koster bare ca $ 100 og kan oppdage lyse fluorescerende markører som myo-2 :: GFP. Oppsettet (figur 1) består av:

  • X-acto hjelper hendene eller alt som kan plassere LED-en (Amazon.com)
  • Lampekabel som har en bryter (lokal maskinvarebutikk)
  • 17-watt Xitanium LED-driver (LED-forsyning)
  • Xitanium-driverkontakt (LED-forsyning)
  • Varmepumpe (LED-forsyning)
  • Spot-objektiv (LED-forsyning)
  • Luxeon V Star optisk holder (LED-forsyning)
  • Royal-Blue Luxeon V-stjerne LED for GFP-deteksjon (LED-forsyning) eller Green Luxeon V-stjerne LED for dsRED-deteksjon (LED-forsyning)
  • Valgfritt eksitasjonsfilter: Roscolux # 4290 CalColor 90 Blå for GFP, eller # 389 Chroma Green for dsRED (Rosco.com | Edmund Optics)
  • Emissionsfilter: Roscolux # 12 Halm for GFP, eller # 19 Brann for dsRED (tilgjengelighet samme som eksitasjonsfiltre)

Detaljer om hvordan du faktisk setter denne enheten sammen kan du finne her og her.

Fig. 1. LED-oppsettet

Fig. 2. Ved hjelp av LED-oppsettet for å oppdage myo-2 :: GFP i et mIn1-dyr.

Fig. 3. Ved hjelp av LED-oppsettet for å oppdage myo-2 :: dsRED.

Når du monterer lysdioden til føreren, må du kontrollere at +/- endene på lysdioden og den nøytrale / ledningen ender på lyskilden, samsvarer med de på føreren. Bruk en ikke-ledende lim, for eksempel silikon lim (Devcon, del nr. 12045, lokal maskinvarebutikk) for å sette objektivholderen på lysdioden. Excitasjonsfiltret kan limes til linsen ved å påføre en liten mengde lim på kanten. Utslippsfiltret kan enkelt limes under mikroskop-målet.

Dette oppsettet har lang levetid, krever ingen oppvarming eller nedkjølingstid, og har ingen stråling. Det kan imidlertid bare oppdage sterke signaler. Vi har brukt oppsettet til å oppdage følgende markører: myo-2 :: GFP (figur 2), sur-5 :: GFP, ajm-1 :: GFP og myo-2 :: dsRED (figur 3).

Bruke LED som en billig kilde for å oppdage GFP og DsRED


Bio: Eri Gentry er en bioteknikkentreprenør, samfunnsorganisasjon for samfunnsforskere og medstifter av BioCurious, den første hackerspace for bioteknologi, i San Francisco Bay Area.



Du Kan Være Interessert

Denne uken i Making: Geeky Pumpkins, DIY Video Game Console og Halloween Projects

Denne uken i Making: Geeky Pumpkins, DIY Video Game Console og Halloween Projects


Maker Spotlight: Matthew Borgatti

Maker Spotlight: Matthew Borgatti


CRAFT Mønster Podcast: Bobble Hat av Fable Handmade Goods

CRAFT Mønster Podcast: Bobble Hat av Fable Handmade Goods


Laget i Japan - Volum 19

Laget i Japan - Volum 19






Siste Innlegg